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EMSA PAGE预制胶是一种使用安全、便捷、高品质的常规尺寸聚丙烯酰胺预制凝胶，适用于EMSA实验。本预制胶有1.5厘米高的浓缩胶(4%)，具有非常优良的分离效果，电泳后条带平整、清晰、细腻、锐利，几乎没有边缘效应；同时本预制胶胶板为玻璃材质，减少了对蛋白的非特异性吸附，电泳效果非常好，达到甚至超过了自配EMSA PAGE胶的电泳效果。

BoGel EMSA PAGE预制胶使用略偏碱性pH的TBE缓冲液制备。本预制胶使用常用的0.5×TBE电泳液，推荐使用百奥莱博1×TBE缓冲液、5×TBE缓冲液以及5×TBE，或参考使用说明自行配制相应的电泳液。

• 本制品使用安全、便捷。本预制胶无需配制，即开即用，去掉梳子即可上样，而传统的EMSA PAGE配制凝胶繁琐费时，并且制胶时还会接触有毒和刺激性试剂。
  
• 本制品质量稳定。本预制胶采用高品质玻璃胶板，和塑料胶板相比，大大减少了胶板对蛋白的吸附，电泳效果更好。本制品流水线灌注，品质稳定可靠，重复性好，不同批次的产品一致性高。
  
• 本制品电泳效果好。本预制胶的蛋白质-核酸复合物分离效果极佳，非常适合低丰度蛋白的检测。
  
• 本制品电泳槽兼容性好。本预制胶兼容市场上主流的小型电泳槽，如Bio-Rad公司的Mini-PROTEAN Tetra Cell电泳槽、Life公司的XCell SureLock Mini-Cell电泳槽(需与百奥莱博提供的特制挡板配合使用)、以及上海天能、北京六一等的mini胶电泳槽或其它胶板宽度在10厘米的电泳槽。
  
• 本制品电泳时间短。本预制胶最快30分钟即可完成电泳，推荐的电泳电压和电泳时间为100V 30～90分钟，即可完成电泳并获得非常平整和锐利的电泳条带。具体的电泳时间取决于凝胶浓度。
  
• 本制品取出凝胶极为便捷。只需用刀片在玻璃胶板一侧轻轻划一下即可，并且玻璃胶板打开极为方便，无需特殊的起撬工具。

凝胶迁移实验是一种用于蛋白与核酸相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验，也可应用于蛋白-DNA、蛋白-RNA相互作用研究。EMSA技术基于进行非变性聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳时，蛋白质-DNA复合物的迁移速度比游离线性DNA片段慢，从而导致DNA迁移率在与蛋白质结合时减慢。EMSA分辨蛋白质-DNA复合物的能力在很大程度上取决于复合物在实验步骤中的稳定性。电泳缓冲液相对较低的离子强度有助于稳定瞬时相互作用，可以通过该方法分析不稳定的复合物。此外，EMSA也可以解决某些蛋白质因子结合导致的DNA构象改变或弯曲。EMSA不局限于蛋白质与DNA的相互作用，也可用于蛋白质-RNA和蛋白质-蛋白质的相互作用的研究。

EMSA作为研究基因调控和确定蛋白质-DNA相互作用的一项重要技术有如下优点。DNA结合蛋白的来源可以是细胞核或全细胞提取物、体外翻译产物或分离纯化的蛋白；可以定性地用于鉴定裂解物中的序列特异性DNA结合蛋白(如转录因子)，并结合相应DNA序列上的点突变来鉴定特定基因上游调控区内的重要结合序列；还可用于定量测量热力学和动力学参数。

• 由于本预制胶保质期较短，需新鲜制备，在您确认订购后约5个工作日才能发货。
  
• 本预制胶不能置于0℃以下冷冻，否则凝胶会冻裂。
  
• 电泳液建议新鲜配制。试剂纯度不够、反复使用或长期放置的缓冲液会降低电泳效果。电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲性能下降，可能使电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
  
• 本预制胶为了兼容几乎所有厂家的小型凝胶电泳槽，所以改进了与电泳槽U型硅橡胶密封条的吻合结构(如Bio-Rad等公司的电泳槽)。建议在电泳时须将具有突起结构的U型硅橡胶密封条取出后反过来安装，使其没有突起的平滑面朝外，从而防止漏液，见下图。一般内槽电泳液加满，外槽电泳液没过电泳槽底部的阳极即可，并且电泳结束后的电泳缓冲液可以作为外槽缓冲液重复使用1～2次。另外，部分公司都已经配套无突起结构的U型硅橡胶密封条，使用这样的U型硅橡胶密封条就不会出现内外槽之间的漏液现象。
  
  图1.Bio-Rad等公司的电泳槽U型硅橡胶密封条的突起结构图。由于百奥莱博的BoGel PAGE预制胶的该部位是平的，使其兼容几乎所有厂家的小型胶电泳槽，所以电泳时须将具有突起结构的硅橡胶密封条(左图)取出后反过来安装(右图)，使其没有突起的平滑面朝外，从而防止漏液。
  
• 由于BoGel PAGE预制胶比Life公司的XCell SureLock Mini-Cell电泳槽配套的NuPAGE Gel或Novex Mini Gel略薄，所以需加特制挡板配合使用。如有需要，请在订购本制品时告知，百奥莱博会免费赠送该特制挡板。

• 样品准备：可参考EMSA试剂盒、生物素标记EMSA探针检测试剂盒。上样缓冲液推荐使用EMSA上样缓冲液。
  
• 预制胶、电泳液的准备：
  
  • 将BoGel EMSA PAGE预制胶从包装袋中取出。
    
  • 将预制胶固定在电泳槽中，平稳、缓慢地拔出梳子。
    
  • 配制0.5×TBE电泳缓冲液。推荐使用1×TBE缓冲液、5×TBE缓冲液以及5×TBE。1×TBE中含有89mM Tris-Borate、2mM EDTA，pH8.3。
    
  • 内槽加满电泳液，外槽加入电泳液没过电泳槽底部的阳极即可。
    • 由于预制胶孔中有残留的储存缓冲液，所以建议用1mL移液枪吸取电泳液轻轻吹打加样孔，将加样孔冲洗干净，去除气泡和残留的储存缓冲液，这样电泳的效果更佳。
• 上样：将10μL吸头的尖端垂直方向轻轻插入到上样孔中即可上样，吸头避免戳破凝胶，更不能使胶板变形导致样品泄漏。
  • 最佳上样量须通过实验来确定，样品过量较易导致条带拖尾和信号过强。
• 将电泳槽盖子盖好，并将电源线插头插入电泳仪电源插孔(红对红，黑对黑)。一般在100V电压，电泳30～90分钟左右即可，电泳至EMSA/Gel-Shift上样缓冲液中的蓝色染料溴酚蓝至胶的下缘1/4处，停止电泳，切勿使探针跑出凝胶。实际电泳时间与电泳液质量、凝胶的浓度和数量等因素有关系，需自行适当调整。
  
• 取出玻璃胶板，将刀片从玻璃胶板一侧轻轻划一下，稍加用力慢慢扳开或用刮板轻轻撬开玻璃胶板，用刮板将凝胶取出。
  
• 后续实验步骤可参考EMSA试剂盒或生物素标记EMSA探针检测试剂盒。

• 电泳示踪染料溴酚蓝扭曲、电泳条带大幅扭曲、电泳时间大幅度延长：
  可能原因是内槽缓冲液泄漏而导致。建议重新夹一下胶板，防止在电泳过程中内槽液面逐步降低。
  
• 使用自己配制的电泳缓冲液与上样缓冲液电泳后条带较模糊：
  本预制胶pH为略偏碱性，缓冲液配制不当，或长期放置变质，都会对本预制胶的电泳效果产生影响。推荐使用1×TBE缓冲液、5×TBE缓冲液以及5×TBE。
  
• 在上样时不可将吸头过度插入上样孔中，吸头的过度插入会使胶板变形，导致样品泄漏。